作用机制:
潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
抗性基因:
对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶(Hph)的基因。至今发现两种来源:
► Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因;
► Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因(常用);
生物应用:
1) 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞);
2) 由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S联合使用,筛选稳定转染两个不同载体的细胞株;
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抗生素 | 抗性机制 | 抗性基因 | 哺乳动物筛选浓度 |
潮霉素B | 干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干扰80S核糖体功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 掺入或者切割DNA引起细胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖体上抑制肽键形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒剂,由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,而且具有抑制翻译的功效;
4)作为驱虫药加入动物饲料;
应用浓度:
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL,最佳浓度需要杀灭曲线来确定。
哺乳动物细胞·200-500 μg/mL;细菌/植物细胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;
产品使用:
使用一:杀灭曲线确定最佳杀死浓度(仅作参考,因个人检测体系而异)
(1)往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞,细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后,往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL,至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
(2)37℃,5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
(3)培养5-7天后更换新的培养液,培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用细胞增殖方法如MTT,CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的最小浓度为最佳筛选浓度。
使用二:筛选稳定转染细胞
(1) 对于贴壁细胞,直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基,然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞,无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基,然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
(2) 5-7天后,如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
(3) 再孵育细胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤一,更换不含潮霉素B的新鲜培养基。
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(10)仪器设计寿命15年,运行费用及维护率低,适用范围广;
(11)标准数据接口,开放式的接口设计,兼容性好,可实现数据共享及多种方式远程控制。
pH 测量范围 | 0-14 |
温度测量范围 | 0-100°C |
参比结构 | ROSS |
液接界 | Sleeve |
电极尺寸 | 120 mm x 12 mm |
pH 精度 | 0.01 |
电极填充液 | 3 M KCI |
WT2纤瘦型漫反射式光电开关、增强型,高精度背景遮蔽,红色光源.检测距离:2…55mm 型号 WT2S-P111 WT2S-P131 WT2S-P211 WT2S-P231 WT2S-N111 WT2S-N131 WT2纤瘦型镜反射式光电开关、红色光源 检测距离:0.8m/PL20A 型号 WT2S-P161 WT2S-N161 WL2纤瘦型镜反射式光电开关,红色光源。检测距离:0.8m/PL20A 型号 WL2S-F111 WL2S-E111 WS/WE2对射式光电开关,红色光源。检测距离:1.2m 型号 WS/WE2S-F113 WS/WE2S-E113 WT4-2漫反射光电开关、背景遮蔽,红色光源,亮通/暗通-DC电源。检测距离:4…130mm,可调校。 型号 WT4-2P132 WT4-2P330 WT4-2P331 WT4-2N132 WT4-2N330 WT4-2N331 WT4-2P430 WT4-2E132 WT4-2E330 WT4-2E331 WT4-2F132 WT4-2F330 WT4-2F331 WL4-2镜反射式光电开关,红色光源,亮通/暗通选择-DC电源。 检测距离:2.8m/PL80A 型号 WL4-2P132 WL4-2P330 WL4-2P331 WL4-2N132 WL4-2N330 WL4-2N331 WL4-2P430 WL4-2E132 WL4-2E330 WL4-2E331 WL4-2F132 WL4-2F330 WL4-2F331 WL4G-2镜反射光电开关,检测透明物体,红色光源,-DC电源。 检测距离:1.6m/PL80A 型号 WL4G-2F330 WS/WE4-2对射式光电开关,亮通-DC电源。 检测距离:0…4m 型号 WS/WE4-2P132 WS/WE4-2P330 WS/WE4-2P331 WS/WE4-2N132 WS/WE4-2N330 WS/WE4-2N331 WS/WE4-2对射式光电开关,暗通-DC电源。 检测距离:0…4m 型号 WS/WE4-2E132 WS/WE4-2E330 WS/WE4-2E331 WS/WE4-2F132 WS/WE4-2F330 WS/WE4-2F331 WT4-2(Teflon)漫反射式光电开关,背景遮蔽,红色光源,亮通-DC电源 检测距离:4…80mm,固定的。 型号 WT4-2P132 T01 WT4-2N132 T01 WS/WE4-2(Teflon)对射 式光电开关,暗通-DC电源 检测距离:0…3mm 型号 WS/WE4-2F T01 WS/WE4-2E T01 WS/WE4-2P T01 WT9-2漫反射光电开关,背景遮蔽 检测距离:30…250mm 型号 WT9-2P110 WT9-2P130 WT9-2P330 WT9-2P410 WT9-2P430 WT9-2P630 WT9-2N130 WT9-2N430 WT9-2漫反射式光电开关,增加型,自学习模式,DC电源 检测距离,可调校:10…450mm 型号 WT9-2P151 WT9-2P351 WT9-2P451 WT9-2P651 WT9-2N151 WT9-2N451 WT9-2漫反射式光电开关,增加型 检测距离,可调校:50…1500mm 型号 WT9-2P160 WT9-2P460 WT9-2N160 WT9-2漫反射式光电开关,V-型,自学习模式,DC电源 检测距离,可调校:10…20mm 型号 WT9-2P141 WT9-2P341 WT9-2P441 WT9-2P641 WT9-2N141 WT9-2N441 WL9-2镜反射式光电开关,基本型,红色光源,DC电源 检测距离,典型最大/配反射镜 :4m/PL801A 型号 WL9-2P130 WL9-2P330 WL9-2P430 WL9-2P630 WL9-2N130 WL9-2N330 WL9-2N430 WL9-2镜反射式光电开关,自学习模式,红色光源,DC电源 检测距离,典型最大/配反射镜:4m/PL80A 型号 WL9-2P131 WL9-2P331 WL9-2P431 WL9-2P631 WL9-2N131 WL9-2N431 WL9-2镜反射式光电开关,焦点35mm,自学习模式,DC电源 检测距离,典型最大/配反射镜:0.4m/PL80A 型号 WL9-2P121 WL9-2P321 WL9-2P421 WL9-2P621 WL9-2N121 |
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