1 UL超微量分光光度计
数量:大量保质期:一年保存条件:常温规格:1个
我准备按照你提供的基本程序尝试一次。1 UL超微量分光光度计还需要问的问题是:
1.洗涤包含体,实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀,对吗?我将沉淀-20度保存,应该没有什么影响吧?另外,我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF,是蛋白酶抑制剂,它是否对目的蛋白有影响呢?
2.尿素洗涤包含体,洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,得到一个收率和纯度最佳的尿素浓度。1 UL超微量分光光度计洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗?但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗?这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗?
3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶,不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲,而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素,对复性有影响吗?
不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我,我再仔细看看。
1 UL超微量分光光度计技术回答:
1)包含体在-20度或-70度保存较好,包含体状态的蛋白稳定性好,一但复性成功,溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF,是蛋白酶抑制剂,应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF,加与不加看你的蛋白的稳定性。
2)洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀,用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬,与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况,1 UL超微量分光光度计选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。
3)用Tris配尿素,OK!
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http://www.1718sh.com/viewp/119.htm
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波长范围:200nm-1100nm波长度:≤±0.5nm波长重复性:≤0.2nm透射比度:±0.5%(τ)透射比重复性:0.2%(τ)光谱带宽:2nm基线直线性:±0.004A(200nm-1000nm)漂移:0.004A/h(500nm处,预热2小时)杂光:0.15%(在220nm处,以Nal测定)
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722系列产品简介产品优势:. 采用的的微机处理技术,自动调0%,调100%,无误差T/A转换,浓度直读功能。. 采用1200条/mm高性能光栅、波长精度高、单色性好,杂散光低。. 采用进口的钨灯,发光效率更高,使用寿命更长,功耗也更低。. 特有的4nm带宽、与同类可见光仪器相比,测试性能更佳。. 超大的样品室,可选购放置100mm比色皿,特别适合电厂、糖厂进行微量分析。. 提供RS232接口,可连接计算机或者直接连接打印机。. 722S型分光光度计是722的出口型。在722基础上做了改进。 技术参数:. 波长驱动:手动. 波长范围(722):330-1000nm. 波长范围(722S):325-1000nm . 波长度:±2nm. 波长重复性:1nm. 光谱带宽:4nm. 透色比度:±0.5%T. 透色比重复性:0.2%T. 透色比范围:0.0-125%T. 吸光度范围:-0.031-2.5A. 浓度显示范围:0-1999. 杂散光:0.5%T@360nm. 稳定性:≤0.5%T/min. Rs232通讯:有. 打印机:支持. 分析软件:支持 752N简介产品优势:. 采用1200条/mm高性能紫外专用光栅、进口钨灯、大规模集成数字电路、新型的单色器结构使仪器 更加稳定。. 自动调0%,调100%,T、A的无误差转换使用简便。. 超大的样品室,可选购放置100mm比色皿,特别适合电厂、糖厂进行微量分析。. 提供RS232接口,可连接计算机或者直接连接打印机。技术参数:. 波长驱动:手动. 波长范围:200-1000nm. 波长度:±2nm. 波长重复性:1nm. 光谱带宽:4nm. 透色比度:±0.5%T. 透色比重复性:0.2%T. 透色比范围:0.0-125%T. 吸光度范围:-0.031-2.5A . 浓度显示范围:0-1999. 杂散光:0.5%T@360nm. 稳定性:±0.003A/小时. Rs232通讯:有. 打印机:支持. 分析软件:支持 |