96T/48T人白介素1(IL-1)elisa试剂盒
产品优势人原钙黏素1(PCDH1)elisa试剂盒说明书
特 异 性:本ELISA试剂盒可同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应。
检测种属:人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
样本范围:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
储存方式人原钙黏素1(PCDH1)elisa试剂盒说明书
存储条件:4℃保存
有 效 期:6个月
产品规格:96T/48T
适用范围:此试剂盒仅用于科研实验,严禁用于临床。
产品特点人原钙黏素1(PCDH1)elisa试剂盒说明书本公司对所有售出的产品保证质量,并提供良好的售后服务,凡购买本公司任意款Elisa试剂盒,均可享受免费代测服务,并可全程提供技术指导。
用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位,因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用,而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。因此,不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。
可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
(2)研究抗酶抗体的合成。
(3)显现微量的免疫沉淀反应。
(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。
血浆样本直接测定前处理方法:
(1)加酶抑制剂:准确采全血若干毫升,注入预冷的加有抗凝剂的塑料指形管中,迅速低温离心,取血浆低温保存待测。抑肽酶有液体的与固体的。固体的抑肽酶可用生理盐水溶解。
(2)酸化处理:每毫升血浆加1mol/l HCl 0.2ml,低温保存待测。以上两种方法,任选一种即可。
血浆样本的间接测定 血标本经提取后,可去除蛋白质等干扰因素,并使微量的生物活性肽浓缩,但较费时,成本也高。常用的提取方法有:
(1)柱层析提取法:有多种层析柱可供提取不同的神经肽,其中较为方便的是用Sep-pak C18层析柱提取。主要步骤:
①柱的预处理:该柱有两头,长头连接注射器,可注入溶液与样品,短头为排出口。预处理时注入乙腈10ml。蒸馏水20ml,使柱中的生物胶活化。
②注入样品(如血浆、脑脊液、腹水、尿等):样品中的水份流出,生物活性肽、蛋白及杂质等吸附在生物胶上。血浆上柱前,如先去除蛋白,可增加柱子的使用时间。
③淋洗:用4%HAC溶液100ml注入柱中,以洗去一些杂质。
④洗脱:用7ml酸性乙腈作为洗脱剂,注入柱中,把生物活性肽洗脱下来,收集在塑料指形管中。
⑤清洗:用乙腈、蒸馏水清洗柱子,以备后用。
⑥将洗脱液吹干,低温保存待测。测定时可加入一定量的缓冲液溶解。
人原钙黏素1(PCDH1)Elisa试剂盒说明书
YS01050B人细胞凋亡抑制因子(IAP)elisa试剂盒
YS01051B人集落刺激因子(CSF)Elisa试剂盒
YS01052B人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIGF)Elisa试剂盒
YS01053B人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC)Elisa试剂盒
YS01054B人CD14分子(CDl4)Elisa试剂盒
YS01055B人凋亡诱导因子(AIF)Elisa试剂盒
YS01056B人白细胞共同抗原(LCA)Elisa试剂盒
YS01057B人CD4分子(CD4)Elisa试剂盒
YS01058B人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)Elisa试剂盒
YS01059B人角化细胞生长因子(KGF)Elisa试剂盒
YS01060B人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)Elisa试剂盒
YS01061B人CXC趋化因子配体16(CXCL16)Elisa试剂盒
YS01062B人CXC趋化因子受体3(CXCR3)Elisa试剂盒
YS01063B人γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)Elisa试剂盒
YS01064B人基质细胞衍生因子1a(SDF-1a)Elisa试剂盒
YS01065B人淋巴细胞趋化因子(Lptn)Elisa试剂盒
YS01066B人α干扰素(IFN-α)Elisa试剂盒
YS01067B人可溶性CD86(sCD86)Elisa试剂盒
YS01068B人白介素27(IL-27)Elisa试剂盒
YS01069B人白介素23(IL-23)Elisa试剂盒
YS01070B人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)Elisa试剂盒
YS01071B人组织因子途径抑制物(TFPI)Elisa试剂盒
YS01072B人干扰素诱导蛋白10(IP-10)Elisa试剂盒
YS01073B人白介素1(IL-1)Elisa试剂盒
YS01074B人白介素17(IL-17)Elisa试剂盒
YS01075B人白介素1β(IL-1β)Elisa试剂盒
YS01076B人表皮生长因子(EGF)Elisa试剂盒
YS01077B人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)Elisa试剂盒
YS01078B人巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)Elisa试剂盒
YS01079B人可溶性E选择素(sE-selectin)Elisa试剂盒
YS01080B人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)Elisa试剂盒
YS01081B人细胞间粘附分子2(ICAM-2)Elisa试剂盒
YS01082B人细胞间粘附分子3(ICAM-3)Elisa试剂盒
YS01083B人结缔组织生长因子(CTGF)Elisa试剂盒
YS01084B人白介素18(IL-18)Elisa试剂盒
YS01085B人粘膜相关上皮趋化因子(MEC)Elisa试剂盒
YS01086B人B细胞活化因子受体(BAFF-R)Elisa试剂盒
YS01087B人血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3)Elisa试剂盒
YS01088B人血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1)Elisa试剂盒
YS01089B人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)Elisa试剂盒
YS01090B人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)Elisa试剂盒
YS01091B人血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)Elisa试剂盒
YS01092B人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)Elisa试剂盒
YS01093B人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa试剂盒
YS01094B人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)Elisa试剂盒
YS01095B人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)Elisa试剂盒
YS01096B人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)Elisa试剂盒
YS01097B人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)Elisa试剂盒
YS01098B人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)Elisa试剂盒
YS01099B人肿瘤坏死因子β(TNF-β)Elisa试剂盒
YS01100B人肿瘤坏死因子α(TNF-α)Elisa试剂盒
YS01101B人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)Elisa试剂盒
YS01102B人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)Elisa试剂盒
YS01103B人转化生长因子β1(TGF-β1)Elisa试剂盒
YS01104B人转化生长因子α(TGF-α)Elisa试剂盒
YS01105B人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β)Elisa试剂盒
YS01106B人干细胞因子受体(SCFR)Elisa试剂盒
YS01107B人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)Elisa试剂盒
YS01108B人可溶性CD40配体(sCD40L)Elisa试剂盒
YS01109B人可溶性CD30配体(sCD30L)Elisa试剂盒
操作流程我公司现货供应,全国包邮,提供免费代测服务,全程提供技术支持,质量保证,欢迎新老客户电话咨询我公司免费索取该试剂盒或相关Elisa试剂盒的详细说明书及价格信息。客户好评欢迎新老客户咨询订购:人原钙黏素1(PCDH1)Elisa试剂盒说明书
Rat 5HT ELISA Kit酶免测定,大鼠血清5羟色胺 elisa试剂盒价格,5HT 实验代检测
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elisa实验周期:收到样本后,7-10个工作日内出结果
收费标准:凡是购买我们试剂盒的客户,可享受检测费全免服务
实验报告:图像曲线、实验步骤、仪器型号、所有试剂及相关数据等
大鼠生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒 Rat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒 Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit 大鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒 Rat growth hormone,GH ELISA KIT大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒 Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒 Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 20,hSP-20 ELISA Kit
Rat 5HT ELISA Kit 5HT 实验代检测 注意事项:(1)外地用户寄标本时需注明以下情况:标本编号;所测项目;是否做复孔;实验后标本是否寄回;联系方式等。(2)北京本地用户,我们工作人员可直接上门取样。
人内脂素/内脏脂肪素elisa试剂盒本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断,具体说明书请联系客服索取,本说明书是通用模板,有些数据不准确.产品规格:48T/96T 国产/RD进口分装/TSZ进口原装
使用说明书工作原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被样本抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。标本要求1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆:将组织加入适量生里盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。储存方式保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1.酶标仪(450nm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱注意事项:1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成:名称 96孔配置 48孔配置 备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无
样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张 无说明书 1份 1份 无自封袋 1个 1个 无注:标准品浓度都不相同,麻烦联系客服索取相应说明书试剂的准备: 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作流程:1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
产品性能:1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。2. 灵敏度:最低检测浓度小于(参考说明书)3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。6. 有效期:6个月免责声明:1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
本品为科研试剂,只对单位实验室学校等正规用途出售。人内脂素/内脏脂肪素elisa试剂盒公司介绍:
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10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准
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邮编:200124
联系人:袁经理
电话:86-,33789605,33933886
手机:15821454195 15821232702
QQ: 2858337867, 2396306055, 2353220159, 2290434496, 593241495 1873188011
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中文名称:人可溶性细胞间粘附分子3(sICAM-3)ELISA试剂盒
规格:48孔/人份、96孔/人份,全部为最新批次
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应
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MX-10257 人本周蛋白(BJP) ELISA试剂盒 英文名:Human Bence-Jones protein,BJP ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10258 人癌胚铁蛋白(CEF) ELISA试剂盒 英文名:Human Carcinoembryonic Ferritin,CEF ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10259 人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)ELISA试剂盒 英文名:Human squamous cell carcinoma related antigen,SCCAg ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10263 人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒 英文名:Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10264 人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒 英文名:Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10265 人Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒 英文名:Human Bcl-2 associated X protein, Bax ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10266 人转移因子(TF)ELISA试剂盒 英文名:Human Transfer factor,TF ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10276 人TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA试剂盒 英文名:Human TGF-beta-inducible early response gene-1,TIEG1 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10277 人肿瘤血管生长因子(TAF)ELISA试剂盒 英文名:Human tumor angiogenesis factors,TAF ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10278 人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒 英文名:Human cytokeratin 20,CK-20 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10279 人细胞角蛋白19(CK-19)ELISA试剂盒 英文名:Human cytokeratin 19,CK-19 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10280 人细胞角蛋白18(CK-18)ELISA试剂盒 英文名:Human cytokeratin 18,CK-18 ELISA Kit 规格:48T/96TMX-10281 人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒 英文名:Human Chromogranin,CgA ELISA Kit 规格:48T/96T
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产品规格:48T/96T
检测方法: ELISA酶联免疫法
说 明 书:随货发送,也可直接联系在线销售索取
测试种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、猪、鸡、鸭elisa试剂盒等种属
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
试剂盒保存及有效期:2-8℃,避光保存:6个月。
产品产地:进口/国产
产品库存:
品牌:自主研发/进口原装
产品价格:价格优惠,欢迎来电洽谈!
试剂盒使用范围:仅供科研检测,不得用于临床.
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人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒定性定量检测一步到位,可同时大批量完成多种属的检测工作,而且一天之内可以检查几百甚至上千份标本,正规专业的我们,一定能帮您,将实验做得更好,更精确。试验过程中,如有任何疑问都可和我们联系,无论是售前、售中、售后我们都将始终如一,将优质服务进行到底。
供应商:上海繁旌生物科技有限公司
上海繁旌生物ELISA试剂盒独特优势:
1、采用全进口原料和抗体:高效、灵敏、特异,严格引进国际技术标准进行批量生产。
2、先进的优化方案:重复性高,可靠性。
3、技术服务:专业,及时,耐心。
4、现货供应:江浙沪隔天到货,外地3-5天到货。
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒技术原理:
(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒操作步骤:
1、包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
2、封闭酶标反应孔:
5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干
洗涤次数3次
3、加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.
将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
4、加入酶标抗体:
酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.
5、加入底物液(现用现配):
首选TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.
6、终止反应:
每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.
7、结果判断:
OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒经过严格交叉反应和干扰测试及稳定性试验;明确的敏感度;针对所有样品类型达到的性能;广泛的检测范围可以满足大多数检测要求;完善的售后服务和免费的技术支持免去您的后顾之忧,凡购买试剂盒者都可享受我公司相应折扣优惠,如有需要,可来电咨询购买!
关于ELISA试剂盒
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
HBsAg试剂特点(检测模式:临床抗体夹心法):包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性(99.98%)提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说(PEI)HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
LISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。
特点:一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
elisa试剂盒测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。
试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。
试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。
试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。
检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大