Balance CD 293 无血清培养基使用方法
1产品简介
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品简介：
Balance CD 293 培养基
Catalog Number: CW001
293细胞无血清悬浮培养基，CELLWISE (自主研发)的Balance CD 293培养基，货号CW001,适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F, 293-T, Expi-293F等)的密度生长和瞬时转染表达。该培养基化学成分确定，无血清、无蛋白、不含动物源性组分，可效表达各种重组蛋白及单抗。CELL-WISE的293培养基自主研发的款培养基，流的质量，平民的价格。全诚招代理商，欢迎广大新老客户前来咨询采购。
Balance CD 293 培养基
Catalog Number: CW001
293细胞无血清悬浮培养基，CELLWISE (自主研发)的Balance CD 293培养基，货号CW001,适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F, 293-T, Expi-293F等)的密度生长和瞬时转染表达。该培养基化学成分确定，无血清、无蛋白、不含动物源性组分，可效表达各种重组蛋白及单抗。CELL-WISE的293培养基自主研发的款培养基，流的质量，平民的价格。全诚招代理商，欢迎广大新老客户前来咨询采购。
2产品信息
CW001型Balance CD 293 无血清培养基产品信息：
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品牌 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
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CELL-WISE |
BalanceCD293 培养基 |
CW01001 |
1L |
3产品描述
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品描述：
Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份，无需添加任何添加物即可使用。（注意：此培养基不包含抗生素以及血清）
Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份，无需添加任何添加物即可使用。（注意：此培养基不包含抗生素以及血清）
4产品用途
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品用途：
CELL-WISE的Balance CD 293无血清培养基仅用于科学研究，不适用于人类或动物的诊断和治疗。
CELL-WISE的Balance CD 293无血清培养基仅用于科学研究，不适用于人类或动物的诊断和治疗。
5产品特点
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基产品点：
1、瞬时转染用培养基，适用于HEK293细胞密度悬浮培养
2、无蛋白、无动物源、化学成分限定
3、即用型完全培养基,无需添加额外成分
1、瞬时转染用培养基，适用于HEK293细胞密度悬浮培养
2、无蛋白、无动物源、化学成分限定
3、即用型完全培养基,无需添加额外成分
6技术参数
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基技术参数：
1、外观：澄清透明红色液体
2、渗透压：275±15 mOSM
3、pH：6.9-7.4
4、无菌检测：无菌
5、内毒素：<5 EU/mL
6、储存条件：2-8℃，避光
7、效期：12个月
1、外观：澄清透明红色液体
2、渗透压：275±15 mOSM
3、pH：6.9-7.4
4、无菌检测：无菌
5、内毒素：<5 EU/mL
6、储存条件：2-8℃，避光
7、效期：12个月
7使用方法
CW001型 Balance CD 293 无血清培养基使用方法：
1、细胞驯化
（1）直接驯化
大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应Balance CD 293 medium，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。
（2）渐进式驯化
注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到2x106 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL，5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25；
②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；
③当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；
④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培养基；
⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×106 cells/mL，细胞活率大于90%，这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL，般传代2-3次后再进行转染实验。
注意: 般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但般从第四代开始状态会有改善
2、细胞传代
（1）取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率；
（2）计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL（100 mL的培养瓶）或50-60 mL（250 mL 的培养瓶）；
（3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养，3-4天传代次。细胞转染在Balance CD 293培养基中，采用商业化转染试剂（例如 Gibco 293Fectin™
ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的效转染。
3、细胞复苏
（1）迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴条件下进行解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制在60s以内）；
（2）轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15mL无菌离心管中，逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基，离心换液（100 g，5 min）去除全部上清，加入新鲜培养基重悬，使得细胞密度达
到0.4-0.6×106 cells/mL；
（3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；
（4）2-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率，如果细胞密度达到1.0×106 cells/mL，活率达到85%以上则可进行传代培养；
（5）如果细胞密度低于1.0×106 cells/mL，则建议对细胞进行离心（100 g，5 min），然后重悬于20-30 mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106 cells/mL 左右，并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。
4、细胞冻存
（1）冻存细胞时，要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells；
（2）事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积；
（3）制备细胞冻存液：46.25% 的新鲜Balance CD 293培养基+46.25% 条件Balance CD 293 培养基，混合之后再加入7.5% DMSO，存放在4℃，般为当天用当天制备；
（4）对细胞样品进行计数；
（5）取样计数，以100 g，3-5 min的条件离心收集细胞，然后用冻存培养基（ 4℃ ）重悬细胞，使得细胞密度为 5-10×106 cells/mL；
（6）取样计数，调整细胞密度；迅速分装细胞到无菌的冻存管中，般2 mL 的冻存管放1-1.5 mL，贴好标签，密封；
（7）将细胞冻存管放到程序降温冻存盒（注意填充异丙醇，4℃预冷）中，置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1℃)，过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。
1、细胞驯化
（1）直接驯化
大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应Balance CD 293 medium，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。
（2）渐进式驯化
注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到2x106 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL，5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25；
②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；
③当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；
④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培养基；
⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×106 cells/mL，细胞活率大于90%，这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL，般传代2-3次后再进行转染实验。
注意: 般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但般从第四代开始状态会有改善
2、细胞传代
（1）取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率；
（2）计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL（100 mL的培养瓶）或50-60 mL（250 mL 的培养瓶）；
（3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养，3-4天传代次。细胞转染在Balance CD 293培养基中，采用商业化转染试剂（例如 Gibco 293Fectin™
ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的效转染。
3、细胞复苏
（1）迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴条件下进行解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制在60s以内）；
（2）轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15mL无菌离心管中，逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基，离心换液（100 g，5 min）去除全部上清，加入新鲜培养基重悬，使得细胞密度达
到0.4-0.6×106 cells/mL；
（3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；
（4）2-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率，如果细胞密度达到1.0×106 cells/mL，活率达到85%以上则可进行传代培养；
（5）如果细胞密度低于1.0×106 cells/mL，则建议对细胞进行离心（100 g，5 min），然后重悬于20-30 mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106 cells/mL 左右，并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。
4、细胞冻存
（1）冻存细胞时，要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells；
（2）事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积；
（3）制备细胞冻存液：46.25% 的新鲜Balance CD 293培养基+46.25% 条件Balance CD 293 培养基，混合之后再加入7.5% DMSO，存放在4℃，般为当天用当天制备；
（4）对细胞样品进行计数；
（5）取样计数，以100 g，3-5 min的条件离心收集细胞，然后用冻存培养基（ 4℃ ）重悬细胞，使得细胞密度为 5-10×106 cells/mL；
（6）取样计数，调整细胞密度；迅速分装细胞到无菌的冻存管中，般2 mL 的冻存管放1-1.5 mL，贴好标签，密封；
（7）将细胞冻存管放到程序降温冻存盒（注意填充异丙醇，4℃预冷）中，置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1℃)，过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。
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